Доклинические исследования

ПЕРМСКОЕ

НАУЧНО — ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ

«БИОМЕД»

УТВЕРЖДАЮ:

Генеральный директор

НПО «Биомед»

_____________В.Ф.Петров

«___»________19___г

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

КОНЦЕНТРИРОВАННОГО ВОДНОГО ОЧИЩЕННОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЕРСИКА

Зам. генерального директора

НПО «Биомед» по научной работе,

доктор медицинских наук О.А.Тимашева

Руководитель лаборатории

биологически активных препаратов,

научный руководитель,

доктор медицинских наук, профессор,

академик РАЕН В.Ф.Петров

СПИСОК ИСПОЛНИТЕЛЕЙ

Ответственный исполнитель:

Ведущий научный сотрудник лаб.

биологически активных препа-

ратов НИИВС НПО»Биомед»

канд биол. наук Г.М.Сафонова

Исполнители:

Старший научный сотрудник лаб.

экологической иммунологии института

экологии и генетики микроорганизмов

УрО РАН, канд. мед. наук Ю.И.Шилов

Младший научный сотрудник лаб.

биологически активных препара-

тов НПО «Биомед» Е.Н.Перевозчикова

Младший научный сотрудник лаб.

биологически активных препара-

тов НПО «Биомед» Н.В.Старцева

Младший научный сотрудник лаб.

биологически активных препара-

тов НПО «Биомед» М.Г.Хилько

Врач-терапевт А.Б.Перевозчиков

Лаборант лаборатории

биологически активных препара-

тов НПО «Биомед» Н.Ю.Бизяева

Содержание

Введение 4

Изучение иммуномодулирующих свойств концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика 5

1.1. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на первичный иммунный ответ 5

1.1.1.Исследование влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество форменных элементов белой крови и морфометрические показатели тимуса и селезенки мышей при первичном иммунном ответе 5

1.1.2. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на клеточный иммунный ответ 7

1.1.3. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на гуморальный иммунный ответ 8

1.2. Характеристика иммунотропной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на модели индуцированной циклофосфамидом иммуносупрессии 9

1.3. Характеристика иммунотропной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на модели глубокой иммуносупрессии 12

1.4. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов 13

1.4.1. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функцию перитонеальных макрофагов и макрофагов селезенки 13

1.4.2. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональную активность макрофагов селезенки на фоне иммуносупрессии 14

1.5. Характеристика влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на иммунную систему мышей, подвергнутых иммобилизационному стрессу 14

1.5.1. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на гемограмму и морфометрические показатели органов лимфомиелоидной системы мышей, подвергнутых иммобили-зационному стрессу 15

1.5.2. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей, подвергнутых иммобилизационному

стрессу 19

1.5.3. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов органов лимфомиелоидной системы мышей, подвергнутых

иммобилизационному стрессу 19

Исследование адаптогенной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика 23

2.1. Исследование действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональное состояние двигательного анализатора 23

2.2.Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на болевую чувствительность 24

2.3. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на поведенческие реакции 25

Изучение антиоксидантной и противоопухолевой активностей концентрированного водного очищенного экстракт из листьев персика 29

3.1. Оценка антиоксидантной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика in vitro 29

3.2. Оценка противоопухолевой активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика 31

Заключение 33

Список использованных источников 34

ВВЕДЕНИЕ

В данном отчете представлены материалы по оценке иммуномодулирующей, адаптогенной, противоопухолевой, антиоксидантной активностей концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика.

Экспериментальное изучение иммуномодулирующей активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика проведено в соответствии с требованиями МЗ РФ к лекарственным препаратам и МУК 2.3.2.721-98 «Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище».

Животные, используемые в экспериментах, содержались в стандартных условиях вивария НПО «Биомед».

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика — продукт, который можно использовать как добавку к пище, парафармацевтик, полученная из листьев персика обыкновенного (Persica vulgaris Mill.) по экологически чистой технологии, обладающая широким спектром фармакологического действия, в том числе иммуномодулирующим, противоопухолевым, антиоксидантным и адаптогенным.

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика содержит комплекс природных соединений фенольной природы (флавоноиды, кумарины, дубильные вещества, сапонины, фенолкарбоновые кислоты). Общее количество полифенольных (окисляемых) веществ в концентрированном водном очищенном экстракте из листьев персика составляет не менее 4%.

В последние десятилетия природные полифенольные соединения привлекают всеобщее внимание исследователей не только как объект химического изучения, но и в качестве перспективных веществ для получения биологически активных препаратов и лекарственных средств. Об этом свидетельствует возросший за последние годы интерес к веществам данной группы как к источникам капилляроукрепляющих, противовоспалительных, желчегонных, антисклеротических, противо-опухолевых и других препаратов [1, 2].

Фенольным соединением называется вещество, содержащее в своей молекуле ароматическое (бензольное) кольцо, которое несет одну или более гидроксильных групп. Образование фенольных соединений – одна из характерных особенностей растительной клетки [3].

Широкое изучение фенольных соединений показало, что вещества данной группы обладают разносторонним действием на организмы животных и человека [1, 2, 4-8].

Ранее других было обнаружено их действие на стенки кровеносных капилляров – Р-витаминоподобное действие [2, 9]. Другими важными свойствами ряда флавоноидов является их антиаггрегационная способность [10-12], противовоспалительное [6, 13-19] и жаропонижающее действие [6, 20].

Для ряда флавоноидных соединений показана антимикробная [15, 21-24] и противовирусная активность [6]. Представители группы изофлавоноидов обладают эстрогенным действием [2]. Флавоноиды могут выступать в качестве радиопротекторов [25] и как радиопотенциирующие средства [26, 27]. Флавоноиды оказывают положительное влияние на метаболизм печени, усиливая желчеотделение [28-30] и повышая детоксикационную функцию [6, 30, 31]. Ряд соединений обладает мочегонным действием [23, 32, 33], другие — повышают тонус кишечника [34, 35]. Показана анаболизирующая активность некоторых флавоноидных соединений [36], сахароснижающие свойства [37], нейротропное [19, 38], адаптогенное [35], антиатеросклеротическое [39-43] действия.

Одним из важных свойств производных γ-пирона и других полифенольных соединений является их противоопухолевое действие. Противоопухолевая активность обнаружена у флавонов, флавонолов, лейкоантоцианидинов, катехинов и других представителей флавоноидов [6, 26, 27, 44-48].

В настоящее время антиоксидантной активности флавоноидов уделяется огромное внимание, как возможному механизму, через который реализуются биологические эффекты данной группы соединений [49-56]. Имеется большое количество работ, указывающих на взаимосвязь адаптогенных, иммуномодулирующих, противоопухолевых и ряда других свойств фенолов с их антиоксидантной активностью [57-72].

Широко известны такие растения, как солодка, календула, бессмертник, софора японская, зверобой, а также березовый гриб чага [1, 73, 74]. Их лечебное действие объясняют присутствием в них веществ фенольной природы (флавоноидов, танинов, кумаринов и др.).

К растениям, содержащим вещества фенольной природы относится и персик. Целебные свойства этого растения известны с древних времен. Наиболее велика роль персика в древней китайской культуре, где он почитался как символ долголетия и ценился наряду с женьшенем, как тонизирующее и общеукрепляющее средство.

Несомненный интерес вызывают материалы о применении экстрактов из плодов, листьев и цветков персикового дерева в медицине Древнего Китая, Кореи и Средней Азии [75-78].

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СВОЙСТВ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ ВОДНЫЙ ОЧИЩЕННЫЙ ЭКСТРАКТ ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЕРСИКА

Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на первичный иммунный ответ
Исследование влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество форменных элементов белой крови и морфометрические показатели тимуса и селезенки мышей при первичном иммунном ответе

Мышей иммунизировали внутрибрюшинно субоптимальной дозой корпускулярного антигена — 5×10⁶ эритроцитов барана в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили один раз в сутки в течение 3-х дней перорально с помощью зонда в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды с иммунизацией антигеном через 1 час после последнего применения. Контрольные животные получали по 0,5 мл дистиллированной воды по аналогичной схеме.

Оценивали влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика in vivo на массу и клеточность центральных (тимуса) и периферических (селезенки) органов иммунитета, а также на показатели белой крови мышей. На 5-е сутки после иммунизации мышей забивали путем декапитации, собирали кровь для анализа гемограммы, вскрывали, выделяли тимус и селезенку. Органы взвешивали на торсионных весах. Для оценки динамики изменения массы органа введён коэффициент, представляющий собой процентное отношение массы органа данного животного к массе его тела. Количество лейкоцитов периферической крови мышей, лейкоцитарную формулу и клеточность органов иммунной системы оценивали по общепринятым методикам.

Данные по влиянию концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на показатели белой крови мышей представлены в табл. 1. Установлено, что концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в дозе 0,01 мл/кг достоверно повышает количество лейкоцитов периферической крови мышей. В этой дозе, а также в дозе 0,005 мл/кг концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика увеличивал и количество лимфоцитов периферической крови. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика ни в одной из испытанных доз не оказала существенного влияния на количество нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов периферической крови мышей. Об этом свидетельствует отсутствие статистически достоверных отличий между показателями опытной и контрольной групп мышей.

Данные по изменениям весового коэффициента тимуса и селезенки (отношение массы органа к массе животного в процентах) и количества клеток в них представлены в табл. 2. Как видно из таблицы, в двух наименьших дозах концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика оказал статистически значимое, по сравнению с контролем, увеличение массы и клеточности тимуса и селезенки. В наибольшей из доз он повышал только количество кариоцитов селезенки.

Таблица 1

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на состав лейкоцитов периферической крови мышей

Группа живот-ных

Доза,

мл/кг

Коли-чество

наблю-

дений

Количест-во лейко-цитов кро-ви, х10⁹/л

Количество форменных элементов крови,

х10⁹/л

Нейтрофилы

п/яд с /яд

Эози-нофилы

Моно-циты

Лимфо-циты

Контроль

4,67

± 0,43

0,35

±0,05

1,45

±0,21

0,02

±0,01

0,21

±0,07

2,62

±0,29

опытный

продукт

0,02

5,00

± 0,77

0,38

±0,09

1,38

±0,38

0,01

±0,007

0,23

±0,05

2,99

±0,41

0,01

6,08

±0,4 *

0,46

±0,08

1,71

±0,16

0,01

±0,01

0,18

±0,02

3,69

±0,23**

0,005

5,61

± 0,33

0,30

±0,02

1,58

±0,13

0,02

±0,01

0,18

±0,02

3,51

±0,26*

0,0025

5,33

± 0,41

0,31

±0,06

1,43

±0,08

0,01

±0,008

0,15

±0,02

3,4

±0,34

0,00125

5,15

± 0,19

0,33 ±0,07

1,64 ±0,13

0,01 ±0,009

0,1 ±0,02

3,03 ±0,20

Примечание. Здесь и в последующих таблицах и рисунках звездочками отмечены показатели, статистически значимо отличающиеся от контрольной группы с разными уровнями значимости: *- р < 0,05; ** — р < 0,01; *** — р < 0,001.

Таблица 2

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на массу, клеточность тимуса и селезенки

Группа животных	Доза, мл/кг	Количе- ство наблю-дений	Весовой коэффициент, %	ЯСК, х 10⁶/орган
1. Тимус
Контроль		9	0,30 ± 0,01	67,7 ± 8,7
опытный продукт	0,02	8	0,32 ± 0,01	88,5 ± 7,2
	0,01	8	0,30 ± 0,03	68,5 ± 4,8
	0,005	8	0,30 ± 0,01	73,2 ± 5,4
	0,0025	8	0,37 ± 0,02 *	110 ± 4,3 ***
	0,00125	8	0,38 ± 0,01 **	94,4 ± 4,6 *
2. Селезенка
Контроль		9	0,72 ± 0,03	110,5 ± 3,6
опытный продукт	0,02	8	1,10 ± 0,26	172,5±19,8**
	0,01	8	1,10 ± 0,26	135,6 ± 14,9
	0,005	8	0,85 ± 0,06	134,2 ± 7,2*
	0,0025	8	0,88 ±0,03 **	161,0±6,1***
	0,00125	8	0,87 ± 0,04 *	138,1±5,7***

1.1.2. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на клеточный иммунный ответ

Опыты выполнены на нелинейных мышах-самцах массой 18-20 г. Мышей сенсибилизировали эритроцитами барана 2·10⁷, которые вводили внутрибрюшинно в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида. концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили трехкратно в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды. Введение эритроцитов барана осуществляли одновременно с последним введением препарата. Контрольные животные получали по 0,5 мл дистиллированной воды по такой же схеме, что и опытные. На пятые сутки вводили разрешающую дозу эритроцитов барана (1×10⁸ клеток в 0,02 мл изотонического раствора натрия хлорида подкожно в подошвенную поверхность стопы задней лапы). В контрлатеральную лапу вводили в том же объеме растворитель (изотонический раствор натрия хлорида). Через 24 часа после разрешающей инъекции антигена оценивали выраженность иммунного воспаления по изменению толщины стопы.

Развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей контрольной группы проявилось появлением через 24 часа после разрешающей инъекции антигена иммунного воспаления, выраженность которого составила 16,4 ± 0,73 %. (табл. 3).

Таблица 3

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Выраженность иммунного воспаления (индекс реакции, %)
Контроль		10	16,4 ± 0,73
опытный продукт	0,02	10	7,8 ± 0,57***
	0,01	10	7,9 ± 0,37***
	0,005	10	14,9 ± 0,41
	0,0025	10	16,8 ± 0,72
	0,00125	10	9,2 ± 0,63***

Введение концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозах 0,02; 0,01 и 0,00125 мл/кг приводило к угнетению развития реакции ГЗТ.

1.1.3. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на гуморальный иммунный ответ

Мышей иммунизировали внутрибрюшинно субоптимальной дозой корпускулярного антигена — 5×10⁶ эритроцитов барана в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида. концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили один раз в сутки в течение 3-х дней перорально с помощью зонда в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды с иммунизацией антигеном через 1 час после последнего применения препарата. Контрольные животные получали по 0,5 мл дистиллированной воды по аналогичной схеме.

К 5-му дню первичного иммунного ответа у контрольных мышей происходило накопление антителообразующих клеток в селезенке, их число составило 123,1 ± 3,46 на 10⁶ЯСК или 13646±683 на орган (табл. 4). При определении титра специфических антител на 7-е сутки опыта было выявлено, что уровень гемагглютининов у контрольных мышей (в виде отрицательного log₂титра антител) был равен 9,25±0,16 (табл. 5).

Иммуностимулирующий эффект продукта проявился в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005 и 0,02 мл/кг, о чем свидетельствовало увеличение абсолютного количества АОК на орган. В дозах 0,0025 и 0,005 мл/кг число АОК было выше показателей контроля не только в абсолютном, но и в относительном выражении (на 10⁶ ЯСК селезёнки). Титр гемагглютинирующих антител (по -log₂ титра) на 7-е сутки достоверно повысился у животных, получавших концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в дозах 0,02 и 0,0025 мл/кг (табл. 5).

В дозе 0,01 мл/кг концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика не влиял на гуморальный иммунный ответ.

Таблица 4

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество АОК при первичном иммунном ответе

Группа животных	Доза, мл/кг	Коли-чество наблю-дений	Число АОК на 10⁶ ЯСК селезёнки	Число АОК на селезенку
Контроль		9	123,1 ± 3,4	13646 ± 683
опытный продукт	0,02	8	132,1 ± 4,6	22475 ±2286**
	0,01	8	131,8 ± 2,7	17824 ±1924
	0,005	8	143,0 ± 7,4*	19089 ±1150**
	0,0025	8	149,4 ±11,4*	24291 ±2374***
	0,00125	8	136,5 ± 8,0	18829 ±1168**

Таблица 5

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на уровень антител при первичном иммунном ответе

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Титр гемагглютининов, (-log₂титра)
Контроль		10	9,25±0,16
опытный продукт	0,02	10	10,25±0,16***
	0,01	10	9,62±0,26
	0,005	10	9,87±0,29
	0,0025	10	10,5 ±0,32**
	0,00125	10	9,87±0,29

В экспериментальной иммунопатологии для скрининга потенциальных иммуномодуляторов общепризнана модель иммунодефицита, индуцированного введением циклофосфамида (ЦФ).

Экспериментальный иммунодефицит моделировали введением мышам-самцам массой 18-20 г внутрибрюшинно 100 мг/кг циклофосфамида (ЦФ) однократно и трехкратно (в течение 3-х дней 1 раз в сутки). На модели однократного введения ЦФ проводили исследование влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на массу и клеточность органов иммунитета (тимуса и селезенки), показатели гемограммы животных, титр гемагглютининов в сыворотке крови и число АОК на высоте первичного иммунного ответа к эритроцитам барана (по методикам описанным выше). Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили перорально 1 раз в сутки в течение 3-х дней в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды. Иммунизацию осуществляли одновременно с последним введением препарата. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика начинали вводить через сутки после введения ЦФ. Показатели опытных групп животных сравнивались с результатами оценки в двух контрольных группах мышей: контроль 1 — животные, получавшие по 0,5 мл дистиллированной; контроль 2 – получавшие ЦФ и по 0,5 мл дистиллированной воды.

У контрольных мышей, иммунизированных эритроцитами барана и не получавших циклофосфамид, на 5-е сутки первичного иммунного ответа количество лейкоцитов в крови составляло (х10⁹/л) 6,8 ± 0,81, палочкоядерных нейтрофилов — 0,25±0,12, сегментоядерных нейтрофилов — 2,28 ± 0,36, эозинофилов — 0,04 ± 0,03, моноцитов — 0,23 ± 0,10, лимфоцитов 3,97±0,3. Однократное введение циклофосфамида (табл.6) животным за сутки до начала введения препарат (контроль 2) приводило к снижению общего количества лейкоцитов на 46,6 %, лимфоцитов на 60 %.

Как видно из табл.6, концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в дозах 0,02 и 0,005 мл/кг восстанавливал сниженное ЦФ количество лейкоцитов. Восстановление общего количества лейкоцитов, наблюдаемое при введении продукта в дозах 0,02 и 0,005 мл/кг, связано с увеличением количества лимфоцитов. В дозе 0,0025 мл/кг концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика также восстанавливал сниженное ЦФ количество лимфоцитов.

Введение ЦФ (табл. 7) приводило к снижению массы тимуса мышей на 24%, массы селезенки на 29 %, количества тимоцитов на 32%, количества спленоцитов на 31,8 % в сравнении с аналогичными показателями у животных, не получавших иммунодепрессант (контроль 1). Применение концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозе 0,00125 мл/кг устраняло дефект иммунитета, проявляющийся уменьшением количества тимоцитов и спленоцитов, о чем свидетельствует полное восстановление исследуемых показателей.

Таблица 6

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество лейкоцитов и их состав в периферической крови мышей на фоне иммуносупрессии, вызванной однократным введением ЦФ

Группа живот-ных

Доза,

мл/кг

Коли-чество

наблю-дений

Количест-во лейко-цитов кро-ви, х10⁹/л

Количество форменных элементов крови,

х 10⁹/л

Нейтрофилы

п/яд с/яд

Эозино-филы

Моно-циты

Лим-фоциты

Контроль 1

6,8

±0,81*

0,25

±0,12

2,28

±0,36

0,04

±0,03

0,23

±0,10

3,97

±0,30 ***

Контроль 2

3,63± 0,75

0,20

±0,08

1,61

±0,46

0,01

±0,008

0,17

±0,07

1,62

±0,19

опытный

продукт

0,02

7,41

±0,81**

0,39

±0,09

2,32

±0,39

0,01

±0,01

0,32

±0,13

4,35

±0,38***

0,01

5,86 ± 0,89

0,35

±0,06

2,67

±0,80

0,01

±0,01

0,34

±0,26

2,47

±0,44

0,005

5,64± 0,48 *

0,20

±0,04

1,92

±0,27

0,02

±0,01

0,28

±0,05

2,80

±0,38 *

0,0025

5,54± 0,58

0,21

±0,04

2,40

±0,26

0,02

±0,01

0,21

±0,04

2,68

±0,31 *

0,00125

4,76 ± 0,27

0,21 ±0,03

2,58 ±0,14

0,03 ±0,01

0,21 ±0,05

1,71 ±0,23

Примечание. Здесь и в табл.7-10, 13-20: *; **; *** – относительно контроля 2.

Введение ЦФ животным (контроль 2) вызывало угнетение накопления АОК в селезенке (табл. 8) и уменьшение количества антител, образующихся к эритроцитам барана (табл. 9). Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика нормализовал нарушенные ЦФ показатели. Нивелирование иммуносупрессирующего действия ЦФ проявилась увеличением под влиянием продукта в дозах 0,02, 0,01 и 0,00125 мл/кг уровня антителообразующих клеток в селезёнке и уровня гемагглютининов во все апробируемых дозах. При этом установлено, что наибольшие сдвиги в титре антител вызвало применение меньшей из использованных доз (табл. 9).

Таблица 7

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на массу, клеточность тимуса и селезенки на фоне иммуносупрессии, вызванной однократным введением ЦФ

Группа живот-ных		Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Весовой коэффициент, %	ЯСК, х10⁶/орган
1.Тимус
Контроль 1			9	0,37± 0,02*	132,5±15,7*
Контроль 2(ЦФ)			9	0,28 ± 0,02	89,2±10,4
опытный продукт	0,02		9	0,33 ± 0,02	116,8±16,1
	0,01		8	0,31 ± 0,03	98,2±14,1
	0,005		9	0,28 ± 0,02	96,0±11,9
	0,0025		9	0,23 ± 0,02	91,6±9,4
	0,00125		8	0,27 ± 0,01	138,5±8,9 **
2.Селезенка
Контроль 1			9	1,24±0,09*	285,5±25,3*
Контроль 2(ЦФ)			9	0,88±0,09	194,5±19,9
опытный продукт	0,02		9	1,32±0,19	228,3±34,5
	0,01		8	1,34±0,15*	261,7 ± 41,1
	0,005		9	1,34±0,07**	223,1 ± 20,3
	0,0025		9	1,29±0,13*	183,3± 15,2
	0,00125		8	1,34±0,14 *	270,7 ±16,7*

Таблица 8

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество АОК при первичном иммунном ответе на фоне иммуносупрессии, вызванной однократным введением ЦФ

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Число АОК на 10⁶ ЯСК селезёнки	Число АОК на селезенку
Контроль 1		9	95,77±18,38**	27208±5558**
Контроль 2(ЦФ)		9	37,11± 4,78	7503±1228
опытный продукт	0,02	9	94,75±19,00**	19629±3774**
	0,01	8	76,5 ±17,08*	18616±4058*
	0,005	9	51,0 ±13,33	11731±3215
	0,0025	9	48,25±15,70	7658±2029
	0,00125	8	85,5 ±14,02**	22957±3807**

Таблица 9

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на уровень антител при первичном иммунном ответе на фоне иммуносупрессии, вызванной однократным введением ЦФ

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Титр гемагглютининов, (-log₂титра)
Контроль 1		10	9,37±0,18*
Контроль 2 (ЦФ)		10	8,75±0,16
опытный продукт	0,02	10	10,0±0,18***
	0,01	10	9,25±0,16*
	0,005	10	10,25±0,16***
	0,0025	10	9,25±0,17*
	0,00125	10	10,62±0,18***

1.3. Характеристика иммунотропной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на модели глубокой иммуносупрессии

На модели глубокого иммунодефицита, достигнутого трехкратным внутрибрюшинным введением циклофосфамида в дозе 100 мг/кг мышам массой 18-20 г, изучено влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на титр гемагглютининов к эритроцитам барана по методике и количество Т-лимфоцитов селезенки в цитотоксической реакции с антитимоцитарной сывороткой. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика использовали однократно перорально в дозах 0,0025; 0,01 и 0,02 мл/кг через сутки после последнего введения ЦФ. Трехкратное введение циклофосфамида (табл. 10) животным (контроль 2) вызвало снижение количества Т-лимфоцитов на 30 % и титра гемагглютининов на 23%.

Таблица 10

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на число Т-лимфоцитов и титр гемагглютининов в селезенке на фоне иммуносупрессии, вызванной трехкратным введением ЦФ (n=10 в каждой группе)

Группа животных	Доза, мл/кг	Т- лимфоциты, %	Титр гемагглютининов, (-log₂титра)
Контроль 1		44,8 ± 1,97***	11,2 ± 0,3***
Контроль 2 (ЦФ)		32,2 ± 1,70	8,6 ± 0,2
опытный продукт	0,02	34,8 ± 1,60	9,6 ± 0,4*
	0,01	26,0 ± 3,20	8,0 ± 0,3
	0,0025	59,0 ± 5,50***	12,8 ± 0,2***

Как видно из табл. 10, концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в наименьшей из доз полностью восстанавливал сниженное трехкратным введением циклофосфамида количество Т-лимфоцитов и повышал титр гемагглютининов к эритроцитам барана.

1.4. Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов

1.4.1. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функцию перитонеальных макрофагов и макрофагов селезенки

На беспородных мышах-самцах массой 18-20 г изучено влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональную активность перитонеальных и селезеночных макрофагов в отношении микробных частиц инактивированного Staphylococcus aureus штамма 209Р. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили однократно внутрижелудочно в дозах 0,001; 0,01 и 0,1 мл/кг. В качестве контроля использованы животные, которым вводили эквиобъемное количество дистиллированной воды.

Макрофаги выделяли по общепринятым методикам. Концентрацию клеток в полученных суспензиях доводили до 5х10⁶/мл. Затем в культуру вносили частицы Staphylococcus aureus. О фагоцитарной функции макрофагов судили по изменению процента фагоцитоза и фагоцитарного числа.

Исследование фагоцитарной активности показало, что концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика активирует фагоцитоз Staphylococcus aureus штамма 209Р перитонеальными макрофагами мышей во всех исследованных дозах, что проявляется увеличением как процента фагоцитоза, так и фагоцитарного числа (табл. 11).

Введение концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика во всех апробируемых дозах повышало количество макрофагов селезенки, участвующих в захвате микробных частиц Staphylococcus aureus (процент фагоцитоза). В наименьшей дозе (0,001 мл/кг) “Олексин” повышал и фагоцитарное число (табл.12).

Таблица 11

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитоз перитонеальными макрофагами Staphylococcus aureus штамма 209Р (n=10 в каждой группе)

Группа животных	Доза, мл/кг	Процент фагоцитоза	Фагоцитарное число
Контроль		70,8 ± 3,2	1,89 ± 0,11
опытный продукт	0,1	83,5 ± 2,2**	2,78 ± 0,35*
	0,01	89,0 ± 1,5***	3,17 ± 0,40**
	0,001	92,6 ± 2,3***	3,78 ± 0,29***

Таблица 12

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов селезёнки в отношении Staphylococcus aureus штамма 209Р (n=10 в каждой группе)

Группа животных	Доза, мл/кг	Процент фагоцитоза	Фагоцитарное число
Контроль		76,0 ± 0,94	2,21 ± 0,11
опытный продукт	0,1	86,0± 2,11***	2,60 ± 0,17
	0,01	86,4± 1,94***	2,42 ± 0,06
	0,001	89,2 ±2,58***	2,75 ± 0,17*

1.4.2. Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональную активность макрофагов селезенки на фоне иммуносупрессии

Патологическое снижение активности макрофагов в организме может стать одним из главных звеньев в патогенезе вторичных иммунодефицитов. Поэтому представлялось целесообразным изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов в модели лекарственной (циклофосфамидиндуцированной) иммуносупрессии. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика во всех апробируемых дозах оказал стимулирующее воздействие на фагоцитарную активность макрофагов селезенки, сниженную однократным введением циклофосфамида в дозе 100 мг/кг за сутки до введения препарата (табл. 13). При этом необходимо отметить, что наибольшую эффективность проявила наименьшая доза.

Таблица 13

Группа животных	Доза, мл/кг	Процент фагоцитоза	Фагоцитарное число
Контроль1		76,0± 1,9 *	2,21 ± 0,13 *
Контроль2		64,6± 1,3	1,79 ± 0,13
опытный продукт	0,1	78,6± 1,8 ***	2,20 ± 0,27
	0,01	83,6± 2,8 ***	2,64 ± 0,35 *
	0,001	84,0± 3,1 ***	2,69 ± 0,24 **

1.5. Характеристика влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на иммунную систему мышей, подвергнутых иммобилизационному стрессу

Для изучения биологического действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на иммунную систему животных, подвергнутых стрессу, осуществляли 9-часовую иммобилизацию мышей-самцов массой 18-20 г в пластмассовых клетках в положении на спине. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили перорально один раз в сутки в течение 3-х дней в дозах 0,00125; 0,005 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды. Контрольные животные, подвергавшиеся иммобилизации (контроль 2), получали по 0,5 мл дистиллированной воды по той же схеме. Для анализа выраженности стрессорной реакции использовали дополнительный контроль – животные, получавшие в течение 3-х суток дистиллированную воду, но не подвергавшиеся иммобилизации (контроль 1). Оценивали влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика in vivo на клеточность и/или массу центральных (тимуса, костного мозга) и периферических (селезенки, паховых лимфатических узлов) органов иммунитета, на показатели гемограммы, а также на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и макрофагов селезенки, костного мозга и лимфатических узлов. Животных забивали декапитацией, собирая кровь для определения количества эритроцитов и лейкоцитов, изучения нейтрофильного фагоцитоза формализированных эритроцитов барана (ФЭБ). Количество эритроцитов, лейкоцитов периферической крови мышей и лейкоцитарную формулу оценивали по общепринятой методике. Выделение органов, определение их массы и весового коэффициента проводили по вышеописанной методике. Влияние препарата на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по модифицированному методу В.Н. Каплина (1993). Для изучения влияния препарата на фагоцитарную активность нейтрофилов к 0,025 мл гепаринизированной крови добавляли 0,0125 мл ФЭБ в концентрации 200^.10⁶/мл , 0,0125 мл полной питательной среды (ППС) с НЕРЕS, встряхивали и инкубировали в течение 30 минут при +37°С. Далее готовили мазки по вышеописанной схеме. Фагоцитарную активность клеток анализировали по проценту фагоцитоза, фагоцитарному числу, фагоцитарному индексу (количество объектов фагоцитоза, которое приходится на одну фагоцитирующую клетку). Рассчитывали также абсолютное количество участвующих в фагоцитозе нейтрофилов крови, исходя из абсолютного числа нейтрофилов и процента фагоцитоза, и абсолютное число объектов фагоцитоза (фагоцитарное число, умноженное на абсолютное количество нейтрофилов). Помимо этого, проведена оценка показателей фагоцитоза в клеточных суспензиях органов лимфомиелоидного комплекса по методу Ю.И.Шилова и С.В. Гейна (1998). Показатели фагоцитоза, учитывая сложности идентификации нефагоцитирующих макрофагов и их дифференциации от дендритных и других сходных по морфологии клеток, рассчитывали по отношению ко всем ядросодержащим клеткам клеточных суспензий.

1.5.1 Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на гемограмму и морфометрические показатели органов лимфомиелоидной системы мышей, подвергнутых иммобили-

зационному стрессу

Изучение относительных показателей периферической крови животных, подвергнутых иммобилизации (контроль 2), выявило характерные для стресса изменения в структуре лейкоцитарной формулы: уменьшение лимфоцитов и эозинофилов и увеличение сегментоядерных нейтрофилов (табл. 14). Снижение количества эозинофилов и увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови данной группы животных присутствовало и в абсолютных цифрах (табл. 15). Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика практически не влиял на показатели белой крови, за исключением некоторого снижения количества палочкоядерных нейтрофилов при применении препарата в дозе 0,005 мл/кг (табл. 14 и 15). У контрольных и опытных групп животных отсутствовала существенная разница в количестве эритроцитов.

Таблица 14

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на относительные показатели белой крови мышей на фоне иммобилизационного стресса

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Нейтрофилы п/яд,% с/яд,%		Эозинофилы,%	Моноциты, %	Лимфоциты, %
Контроль 1		10	12,0 ±1,9	19,5 ± 2,8*	0,37 ±0,15*	2,3 ± 0,7	65,7 ± 4,66*
Контроль 2 (стресс)		10	12,7 ±2,3	29,8 ± 3,3	0	4,8 ± 1,7	52,4 ± 4,15
опытный продукт	0,02	10	10,0 ±2,0	31,5 ± 3,6	0,09 ±0,09	4,2 ± 1,1	54,1 ± 5,69
	0,005	10	4,2 ±1,0*	36,0 ± 5,4	0	2,4 ± 0,6	57,3 ± 5,54
	0,00125	10	8,7 ±1,7	27,7 ± 3,6	0,10 ±0,10	3,4 ± 1,0	60,1 ± 1,02

Таблица 15

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на количество эритроцитов и лейкоцитов и их состав в периферической крови мышей на фоне иммобилизационного стресса (n = 10 в каждой группе)

Группа животных	Доза, мл/кг	Эритро-циты, х10¹²/л	Лейко-циты, х10⁹/л	Количество форменных элементов крови, х 10⁹/л
Группа животных	Доза, мл/кг	Эритро-циты, х10¹²/л	Лейко-циты, х10⁹/л	Нейтрофилы п/яд с/яд		Эозинофилы	Моноциты	Лимфоциты
Контроль 1		8,0 ±0,4	4,1 ±0,2	0,50±0,08	0,83 ±0,14*	0,015 ±0,004*	0,09 ±0,03	2,73 ±0,25
Контроль 2 (стресс)		8,2 ±0,4	4,7 ±0,4	0,58±0,14	1,42 ±0,21	0	0,19 ±0,07	2,52 ±0,27
опытный продукт	0,02	7,6 ±0,8	5,0 ±0,5	0,51±0,13	1,68 ±0,32	0,001 ±0,001	0,22 ±0,07	2,52 ±0,38
	0,005	8,5 ±0,5	3,6 ±0,3	0,14±0,03*	1,38 ±0,28	0	0,08 ±0,01	2,03 ±0,21
	0,00125	9,2 ±0,5	3,9 ±0,4	0,34±0,07	1,15 ±0,26	0,002 ±0,002	0,14 ±0,04	2,32 ±0,25

Иммобилизация животных вызывала существенное изменение морфометрических показателей органов иммунной системы (табл. 16). У мышей, подвергнутых стрессу (контроль 2), происходило уменьшение массы и клеточности тимуса, селезенки и лимфатических узлов. Влияние стресса на клеточность костного мозга носило противоположный характер и проявлялось увеличением количества кариоцитов. Применение концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в наибольшей дозе (0,02 мл/кг) приводило к восстановлению измененных морфометрических показателей тимуса, костного мозга, селезенки, лимфатических узлов (табл. 16). При введении концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозе 0,00125 мл/кг происходило увеличение числа клеток тимуса сниженного стрессом.

Таблица 16

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на массу и клеточность тимуса, селезенки, периферических лимфатических узлов (паховых) и клеточность костного мозга на фоне иммобилизационного стресса (n=10 в каждой группе)

Группа живот-ных	Доза, мл/кг	Тимус		Селезенка		Лимфатические узлы		Костный мозг
Группа живот-ных	Доза, мл/кг	Весовой коэффи-циент, %	ЯСК х10⁶/ор-ган	Весовой коэффи-циент, %	ЯСК х10⁶/ор-ган	Весовой коэффи-циент, %	ЯСК х10⁶/ор-ган	ЯСК х10⁶/ор-ган
Контроль 1		0,33±0,04*	129,0 ±16,2***	0,55±0,09	89,5 ± 9,2**	0,20±0,01**	13,68 ± 2,31**	9,43 ± 2,66*
Контроль 2 (стресс)		0,19±0,01	47,5 ± 5,5	0,32±0,05	49,7 ± 7,5	0,12±0,01	5,34 ± 0,73	20,46 ± 2,02
опытный продукт	0,02	0,27±0,02*	95,1 ±16,5*	0,76±0,15*	119,3 ±17,3**	0,16±0,01	8,28 ± 0,72*	13,78 ± 1,91*
	0,005	0,16±0,01	37,5 ± 5,2	0,44±0,10	62,0 ± 7,3	0,09±0,02	6,11 ± 1,16	16,06 ± 1,98
	0,00125	0,19±0,02	69,4 ± 5,7*	0,24±0,02	50,5 ± 5,41	0,08±0,03	4,67 ± 0,81	17,08 ± 3,84

1.5.2 Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей, подвергнутых иммобилизационному стрессу

Иммобилизация приводила (табл. 17) к снижению фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в отношении формалинизированных эритроцитов барана (ФЭБ), что проявлялось уменьшением всех исследуемых относительных показателей фагоцитоза. При этом не отмечено статистически достоверных изменений абсолютного количества фагоцитирующих клеток. Это связано с компенсаторным увеличением общего число нейтрофилов в периферической крови. Тем не менее, по другому интегральному показателю — общему количеству захваченных клетками объектов на 1 л крови — выявлено статистически значимое угнетение нейтрофильного фагоцитоза.

В наибольшей из апробированных доз (0,02 мл/кг) концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вызвал недостоверное повышение относительных показателей фагоцитоза и достоверно увеличивал абсолютное количество захваченных нейтрофилами ФЭБ в расчете на 1 л крови (табл. 17).

Таблица 17

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность нейтрофилов мышей на фоне иммобилизационного стресса (n = 10 в каждой группе)

Группа живот-ных

Доза,

мл/кг

Количест-во фагоци-тирующих клеток,

х 10⁹/л

Общее количество захвачен-ных объ-ектов,

х 10⁹/л

% фагоци-тоза

Фагоци-тарное число

Фагоци-тарный индекс

Контроль 1

0,57

±0,13

0,87

±0,23*

38,7

±6,47**

0,57

±0,12**

1,35

±0,11*

Контроль 2

(стресс)

0,31

±0,13

0,20

±0,05

15,3

±4,06

0,18

±0,05

1,10

±0,03

опытный

продукт

0,02

0,44

±0,12

0,52

±0,13*

22,4

±4,05

0,27

±0,05

1,20

±0,06

0,005

0,25

±0,11

0,24

±0,12

14,7

±5,01

0,16

±0,05

1,05

±0,03

0,00125

0,32

±0,06

0,42

±0,09

25,6

±5,45

0,32

±0,06

1,27

±0,14

1.5.3 Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность макрофагов органов лимфомиелоидной системы мышей, подвергнутых иммобилизационному стрессу

Исследование воздействия стресса на фагоцитарную активность клеток селезенки и костного мозга также выявило достоверные изменения фагоцитарной активности клеток данных органов по абсолютным показателям — соответственно снижение и увеличение (табл. 18). Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в дозах 0,02 и 0,005 мл/кг повышал количество фагоцитирующих клеток селезенки и общее количество захваченных клетками объектов фагоцитоза, а абсолютное число фагоцитирующих клеток костного мозга и общее количество захваченных ими объектов уменьшал до уровня показателей контроля 1, проявляя выраженное антистрессорное действие.

Таблица 18

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность клеток селезенки мышей на фоне иммобилизационного стресса (n = 10 в каждой группе)

Группа живот-ных	Доза, мл/кг	Количест-во фаго-цитирую-щих клеток на орган, х 10⁶	Общее количест-во захва-ченных объектов, х 10⁶	% фагоцити-рующих клеток (на 100 ЯСК)	Среднее число объектов на 1 ЯСК	Фагоци-тарный индекс
Контроль 1		15,8±3,65	17,9 ±4,3	16,8±3,52	0,18±0,03	1,07±0,04
Контроль 2 (стресс)		10,9±1,67	12,7 ±1,8	22,8±2,48	0,26±0,03	1,16±0,03
опытный продукт	0,02	27,7±4,26**	32,0±4,9**	25,4±4,63	0,29±0,06	1,14±0,03
	0,005	21,4±4,29*	26,3±5,4*	33,8±5,39	0,42±0,07	1,23±0,05
	0,00125	16,2±3,76	19,1±4,4	33,0±7,43	0,40±0,09	1,17±0,05

Изучение фагоцитарной активности макрофагов лимфатических узлов не выявило различий между изучаемыми показателями как в контрольных, так и в опытных группах (табл. 19).

Таблица 19

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность клеток лимфатических узлов мышей на фоне иммобилизационного стресса (n = 10 в каждой группе )

Группа животных

Доза,

мл/кг

Количество фагоцити-рующих клеток на орган, х 10⁶

Общее количест-во захва-ченных объектов,

х 10⁶

% фагоцити-рующих клеток (на

100 ЯСК)

Среднее число объектов на

1 ЯСК

Фагоци-тарный индекс

Контроль 1

2,92

±1,20

3,6

±1,5

18,2

±4,27

0,22

±0,06

1,14

±0,06

Контроль 2 (стресс)

1,69

±0,75

2,3

±1,2

25,6

±8,95

0,33

±0,14

1,18

±0,10

опытный

продукт

0,02

1,30

±0,32

1,5

±0,4

14,7

±2,85

0,16

±0,03

1,07

±0,03

0,005

1,57

±0,34

1,7

±0,3

27,8

±5,31

0,31

±0,06

1,09

±0,04

0,00125

0,67

±0,20

1,0

±0,2

19,4

±4,78

0,27

±0,07

1,28

±0,15

У мышей, подвергнутых иммобилизации, происходило увеличение абсолютных показателей фагоцитарной активности клеток костного мозга в сравнении с контрольной группой животных, при этом существенных различий относительных показателей не было (табл. 20). На фоне применения концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозе 0,02 мл/кг абсолютное число фагоцитирующих клеток и общее количество захваченных объектов фагоцитоза устанавливалось на уровне контрольной группы животных. В данной дозе, а также в дозе 0,005 мл/кг наблюдалось уменьшение относительных показателей фагоцитоза по сравнению с показателями животных из группы контроль 2 (стресс).

Таблица 20

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на фагоцитарную активность клеток костного мозга мышей на фоне иммобилизационного стресса (n = 10 в каждой группе )

Группа животных

Доза,

мл/кг

Количество фагоцити-рующих

клеток на орган, х 10⁶

Общее ко-личество захваченных объектов,

х 10⁶

% фагоцити-рующих клеток (на

100 ЯСК)

Среднее число объектов на

1 ЯСК

Фагоци-тарный индекс

Контроль 1

1,70

±0,36**

1,8

±0,5**

17,0

±2,44

0,18

±0,03

1,07

±0,03

Контроль 2 (стресс)

4,44

±0,87

5,2

±0,8

21,5

±3,29

0,25

±0,02

1,25

±0,14

опытный

продукт

0,02

1,25

±0,44**

1,3

±0,5**

10,0*

±3,60

0,11

±0,04*

1,05

±0,05

0,005

2,45

±0,58

2,5

±0,5*

14,8

±2,97

0,15

±0,02*

1,02

±0,01

0,00125

2,81

±0,79

3,1

±1,0

22,4

±7,18

0,25

±0,09

1,06

±0,04

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика при профилактическом применении в дозе 0,02 мл/кг оказал выраженное антистрессорное действие, препятствуя изменению клеточности органов лимфомиелоидного комлекса и восстанавливая абсолютные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов и фагоцитов селезенки. Помимо этого препарат препятствовал стрессорной активации абсолютных показателей фагоцитоза в костном мозге.

Таким образом, исследование иммунотропности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика показало, что он обладает выраженной иммунодулирующей активностью: стимулирует накопление АОК в селезенке, повышает титр антител к эритроцитам барана, угнетает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа, повышает фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и макрофагов селезенки.

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в экспериментальной модели иммунодефицита, вызванного циклофосфамидом, восстанавливает активность макрофагов селезенки, стимулирует накопление АОК, повышение титра антител и количество Т-лимфоцитов селезенки, препятствует снижению клеточности органов иммунной системы, увеличивает количество Т-лимфоцитов селезенки, т.е. способствует восстановлению гуморального и клеточного звеньев иммунной системы.

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в экспериментальной модели иммунодефицита, вызванного иммобилизационным стрессом, предупреждает изменения клеточности тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и фагоцитарной активности макрофагов селезенки, костного мозга и нейтрофилов периферической крови.

2.ИССЛЕДОВАНИЕ АДАПТОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ КОНЦЕНТРИРОВАННОГО ВОДНОГО ОЧИЩЕННОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЕРСИКА

В данном разделе проведена оценка адаптогенных свойств концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика по его влиянию на показатели неспецифической резистентности и реактивности организма, а также некоторые интегральные функции центральной нервной системы (мышечную и силовую выносливость, эмоциональную и исследовательскую активность животных, болевую чувствительность).

2.1 Исследование действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональное состояние двигательного анализатора

Исследование действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональное состояние двигательного анализатора проводилось в тестах влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на мышечную и силовую выносливость, пробе с поднятием грузиков.

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на мышечную выносливость изучено в тесте плавания (по Рыловой М.Л.) на мышах весом 20-22 г обоего пола, которые предварительно в течение 3 суток получали концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика перорально с помощью зонда в дозах 0,0025 и 0,01 мл/кг 1 раз в сутки. Тесты проводились через 1 час после последнего введения препарата. Контрольные животные получали то же самое количество дистиллированной воды. Для проведения теста использовали емкость с водой (столб воды 17-18 см, температура 21±0,5^ºС). Каждое животное получало нагрузку, равную 5% от массы тела (груз прикрепляли у основания хвоста). Учитывали время плавания до первого погружения.

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на силовую выносливость изучено в тесте подвисания на мышах весом 20-22 г обоего пола, которые предварительно в течение 3 дней получали концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика по схеме, изложенной выше (см. мышечную выносливость). Животные удерживались передними лапами на горизонтальной проволоке. Учитывалось время удержания.

Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на мышечную устойчивость проводили на мышах в пробе с поднятием грузиков. К пластине, представляющей собой мелкую металлическую сетку весом 19 г, присоединяли цепь из грузиков заданной массы. Мышь, после захвата ею пластины, поднимали за хвост вверх и учитывали количество и массу поднятых грузиков. Затем вычисляли процентное отношение удержанного веса к массе животного. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили в трех дозах 0,0025; 0,01 и 0,02 мл/кг 1 раз в сутки в течение 3-х дней.

Изучение воздействия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на опытных животных в тестах на мышечную (плавание) и силовую (подвисания на горизонтальной проволоке) выносливость (табл. 21), в пробе с поднятием грузиков (табл. 22) выявило способность концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика повышать устойчивость животных к физическим нагрузкам.

Таблица 21

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на функциональное состояние двигательного анализатора

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество животных	Мышечная выносливость, сек	Силовая выносливость, сек
Контроль	—	8	548,4±141,3	132,6±24,9
опытный продукт	0,01	8	1005,0±198,5**	315,8±54,0**
опытный продукт	0,0025	8	726,0±101,0	136,8±21,9

В табл. 21 показано, что в тестах на мышечную и силовую выносливость стимулирующее влияние олексина проявилось в дозе 0,01 мл/кг. В меньшей дозе препарат не оказывал подобного действия.

Данные, представленные в табл. 22, свидетельствуют, что концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика во всех апробируемых дозах повышает мышечную устойчивость животных. В тесте с поднятием грузиков этот эффект проявился увеличением отношения массы удержанного груза к собственной в опытных группах по сравнению с контрольными.

Таблица 22

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на мышечную устойчивость

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Мышечная устойчивость, %
Контроль		8	176,3±10,8
опытный продукт	0,02	8	211,4±18,4**
	0,01	8	254,7±11,7***
	0,0025	8	220,8±13,9*

2.2 Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на болевую чувствительность

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на болевую чувствительность изучено на 30 мышах весом 20-22 г обоего пола, получавших концентрированный водный очищенный экстракта из листьев персика трехкратно по схеме, аналогичной представленной в тесте на мышечную выносливость. Животных помещали на металлическую поверхность нагретую до 65±0,5ºС, с ограничительным цилиндром диаметром 15 см и высотой 17 см [79]. Учитывали время до первого облизывания лапок (латентный период) и запрыгивания на край цилиндра.

Латентный период (до первого облизывания задних лапок) у контрольной группы мышей составила 19,2±2,7 сек, общая продолжительность пребывания на нагретой поверхности (до запрыгивания на край ограничительного цилиндра) – 208,0±16,0 сек (табл. 23)

Таблица 23

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на болевую чувствительнось

Группа животных	Доза, мл/кг	Количество наблюдений	Латентный период, сек	Продолжи-тельность, сек
Контроль	—	10	19,2±2,7	208,0±16,0
опытный продукт	0,01	10	28,8±5,4	258,3±16,2*
опытный продукт	0,0025	10	31,2±4,0*	244,1± 4,1*

В таблице показано, что введение концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозе 0,0025 мл/кг увеличивало продолжительность латентного периода. В обеих апробируемых дозах концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика» повышал порог болевой чувствительности, что проявилось в увеличении общей продолжительности нахождения животных опытных групп на нагретой поверхности.

2.3 Изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на поведенческие реакции

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на поведенческие реакции оценивали в тесте «открытое поле» на мышах весом 18-20 г обоего пола, которые получали концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг перорально по схеме 1 раз в сутки в течение 3-х дней. Исследования проводили через 24 часа после последнего введения препарата. Продолжительность теста 3 минуты. Животных помещали в центр площадки, разбитой на квадраты. Регистрировали время до первого посещения темного отсека («норки») (латентный период), число стоек и обследованных окон (реакция оглядывания), число посещаемых квадратов (двигательная активность), число умываний (грумминг), число актов дефекации и уринации (эмоциональность, вегетативные реакции), количество посещений «норки», время нахождения в «норке».

Влияние концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на сниженную введением эритроцитов барана функциональную активность нервной системы изучено на белых беспородных мышах обоего пола массой 18-20 г в тесте «открытое поле» по представленным выше показателям. Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вводили перорально в течение 3-х дней 1 раз в сутки в дозах 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,01 и 0,02 мл/кг в 0,5 мл дистиллированной воды. Эритроциты барана вводили внутрибрюшинно в субоптимальной дозе (5х10⁶) в 0,5 мл изотонического раствора натрия хлорида через 1 час после последнего введения препарата. Для анализа выраженности влияния иммунизации эритроцитами барана на поведенческие реакции мышей использовали две контрольные группы животных: контроль 1 – мыши, получавшие в течение 3-х суток по 0,5 мл дистиллированной воды, но не подвергавшиеся иммунизации; контроль 2 – мыши, получавшие в течение 3-х суток по 0,5 мл дистиллированной воды с последующей иммунизацией антигеном. Тесты проводили через 24 часа после введения антигена.

При изучение влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика на поведенческие реакции (тест «открытое поле») в качестве препарата сравнения использовали экстракт родиолы розовой, обладающий стимулирующими свойствами в дозе 0,05 мл/кг, который вводили перорально через зонд по таким же схемам, что и опытный продкут.

Изучение поведенческих реакций контрольной группы мышей в тесте «открытое поле» показали, что среднее количество посещенных полей составляет 17,1±0,41, горизонтальных стоек – 22,0±0,66, исследованных отверстий – 5,5±0,29, латентный период до первого посещения темного отсека – 23,5±1,6 сек, количество посещений темного отсека — 3,3±0,08, общая продолжительность нахождения в темном отсеке – 78,5±3,11 сек (табл. 24).

Исследования показали, что экстракт родиолы розовой жидкий в дозе 0,05 мл/кг и концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозах 0,02, 0,005 и 0,0025 мл/кг стимулировали двигательную активность и ориентировочно-исследовательские реакции животных. Эффекты концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика при применении его в дозе 0,0025 мл/кг находились на одном уровне с эффектами родиолы розовой, являющейся признанным стимулирующим средством.

Исследуемые показатели при введении концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в дозах 0,01 и 0,00125 мл/кг находились на уровне контроля. Данные по влиянию препаратов на эмоциональность не приводятся в связи с отсутствием значимых различий между животными опытных и контрольной групп и группы сравнения.

Введение мышам субоптимальной дозы эритроцитов барана через сутки вызывало у животных (контроль 2) угнетение двигательной активности и ориентировочно исследовательских реакций, по сравнению с не иммунизированными мышами (контроль 1), что проявилось уменьшением количества обследованных полей на 40 %, горизонтальных стоек на 20 %, исследованных отверстий на 41,5 %, количества посещений темного отсека на 21 %, латентного периода до первого посещения темного отсека на 55,5 % и увеличением общей продолжительность нахождения в темном отсеке на 45 % (табл. 25).

В данном тесте различий в опытных и контрольных группах по показателю эмоциональности не наблюдалось, поэтому эти данные не приводятся.

Табл. 25 показывает, что введение экстракта родиолы розовой и концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика во всех апробируемых дозах иммунизированным животным восстанавливает сниженную двигательную активность мышей. В дозах 0,02, 0,005, 0,0025 и 0,00125 мл/кг концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вызывал стимуляцию ориентировочно-исследовательских реакций, превосходя по активности экстракт родиолы розовой. Укорочение латентного периода до первого посещения темного отсека у мышей второй контрольной группы, по-видимому, выступает в качестве патологической активности, вызванной центральным действием провоспалительных цитокинов, уровень которых повышается на фоне большинства форм иммунного ответа [80], что подтверждается уменьшением количества посещений темного отсека и существенным увеличением продолжительности пребывания в нем. В этом случае удлинение латентного периода при введении концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика и экстракта родиолы носит адаптогенный характер. Наиболее выраженная активность концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика проявилась при применении его в наименьшей дозе (0,00125 мл/кг), в которой препарат при введении животным на обычном фоне не вызывал стимуляции поведенческих реакций (табл. 25).

Таким образом, в исследованных моделях концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика проявил себя как препарат, сходный по биологической активности с классическими адаптогенами. По ряду показателей он оказался более эффективным, чем эталонный препарат сравнения — экстракт родиолы розовой.

Таблица 24

Влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика и экстракта родиолы розовой на поведенческие реакции животных (n=8 во всех группах)

Группа живот-ных	Доза, мл/кг	Обследован-ные поля	Горизонталь-ные стойки	Обследован-ные окна	Латентный период , сек	Посещения темного отсека	Темный отсек, сек
Контроль		17,16±0,41	22,0±0,66	5,5±0,29	23,5±1,6	3,3±0,08	78,5±3,1
Родиола	0,05	28,5±0,72***	27,5±1,53***	11,0±0,96***	36,3±5,9	2,5±0,19**	33,0±4,0***
опытный продукт	0,02	26,0±0,85***	27,1±0,42***	9,8±0,46***	15,3±1,0***	3,5±0,09	56,0±2,6***
	0,01	18,6±0,75	19,6±1,00	6,8±0,79	19,0±1,9	3,1±0,16	78,0±4,9
	0,005	22,3±1,31**	20,5±1,07	7,5±0,62**	27,0±4,3	3,0±0,14	64,1±4,1*
	0,0025	24,8±0,68***	33,6±1,12***	11,1±0,45***	29,0±2,2	3,8±0,15**	42,5±1,3***
	0,00125	20,5±1,61	18,6±1,39	5,8±0,65	40,6±2,2***	3,5±0,13	71,6±6,4

Таблица 25

Влияния концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика и экстракта родиолы розовой на поведенческие реакции животных при иммунизации эритроцитами барана (n=8 во всех группах)

Группа животных	Доза, мл/кг	Обследован-ные поля	Горизонталь-ные стойки	Обследован-ные окна	Латентный период , сек	Посещения темного отсека	Темный отсек, сек
Контроль 1		13,6±1,02***	15,0±0,78**	5,3±0,46**	27,5±1,7***	2,3±0,13*	79,8±2,7**
Контроль 2		8,1±0,47	12,0±0,47	3,1±0,31	12,0±0,4	1,8±0,12	144,1±2,3
Родиола	0,05	10,6±0,99*	12,5±0,94	3,3±0,20	17,6±2,1*	2,5±0,13**	101,6±6,8***
опытный продукт	0,02	21,3±1,90***	15,0±0,60**	6,1±0,60***	21,3±2,4**	2,8±0,25**	70,1±8,2***
	0,01	10,8±0,40**	10,6±2,36	2,8±0,38	12,1±0,5	2,1±0,06*	112,0±9,2**
	0,005	16,3±0,49***	15,6±1,02**	4,0±0,65	14,0±0,3**	2,8±0,26**	98,8±6,7***
	0,0025	18,6±0,46***	17,0±0,62***	5,1±0,43**	15,0±0,7**	2,5±0,25*	75,3±6,6***
	0,00125	18,3±1,34***	15,8±1,00**	6,3±0,64***	20,5±1,4***	3,1±0,33**	73,8±7,8***

Таким образом, концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика оказывает адаптогенное действие, проявляющееся повышением мышечной и силовой выносливости, порога болевой чувствительности, стимуляцией ориентировочно-исследовательских реакций, в том числе сниженных иммунизацией корпускулярным антигеном – эритроцитами барана.

ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ И ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЕЙ КОНЦЕНТРИРОВАННОГО ВОДНОГО ОЧИЩЕННОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ ПЕРСИК

3.1. Оценка антиоксидантной активности Концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика in vitro

Для исследования антиоксидантных свойств концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика был применен фотохемилюминесцентный метод, моделирующий окисление триптофансодержащих белков и влияние веществ на этот процесс [81, 82]. В качестве соединения, моделирующего белок, использован пептид глицилтриптофан фирмы Sigma. Для сенсибилизации окисления по радикальному пути (активные частицы – пероксидные радикалы RO₂^., супероксид O₂^.) использовали рибофлавин (НПО “Витамин”). Остальные реактивы “химически чистые”. Буферный раствор, содержащий 0,1 М Gly-Trp, 2 мкМ рибофлавина и испытуемый препарат, облучали монохроматическим светом с l=436 нм. Концентрацию препарата подбирали экспериментально. Через 60 сек после облучения раствор перекачали в кювету высокочувствительной фотометрической установки и регистрировали интенсивность хемилюминисценции. В качестве характеристики антиоксидантной активности использовали величину с^1/2— концентрация 50%-ного ингибирования, при которой интенсивность хемилюминисценции снижается в 2 раза (чем меньше данная величина, тем эффективней препарат), а также обратная величина – 1/с^1/2, показатель определяющий предельное разбавление препарата, при котором сохраняется антиоксидантная активность. Антиоксидантное действие препарата сравнивалось с таковым стандартного образца рутина.

Изучение антиоксидантных свойств концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика проведено при участии сотрудников лаборатории химической биофизики ИБХФ РАН (Москва) Лозовской Е.Л. и Макареевой Е.Н.

Результаты проведенных исследований, свидетельствуют о том, что концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика является эффективным антиоксидантом – его добавление в модельную систему вызывает снижение скорости окисления глицилтриптофана и, соответственно, приводит к уменьшению регистрируемой интенсивности хемилюминисценции (табл. 26). Сравнение с антиоксидантным действием, проявляемым экстрактами и настойками известных лекарственных растений, показывает, что концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика превосходит по своей активности большинство из них и проявляет антиоксидантную активность такого же порядка, как экстракт родиолы розовой (рис.).

Таблица 26

Результаты испытаний антиоксидантного действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика

Концентрация половинного ингибирования (с 1/2 ), % от исходного препарата

0,00010±0,00002

Сравнение с антиоксидантным действием рутина

(с ½ = 0,08 мг/л)

Антиоксидантное действие неразбав-ленного препарата соответствует содержанию (8±1)х10⁴ мг/л рутина

Антиоксидантный эффект

(1/с ½ ), усл.ед.

1000 000

2,5^.10^-57,5^.10^-510^-61,25 ^.10^-6

разведение

2,5^.10^-57,5^.10^-510^-61,25 ^.10^-6

разведение

Рис. Сравнительная характеристика антиоксидантной активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика, экстрактов и настоек лекарственных растени

3.2. Оценка противоопухолевой активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика

Оценка противоопухолевой активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика проведена по программе скрининга на противоопухолевую активность по методике, рекомендованной ФК России и принятой в онкологическом научном центре РАМН. В опытах были использованы следующие опухолевые штаммы перевиваемых опухолей мышей:

аденокарцинома молочной железы Са-755, которую прививали мышам-самкам линии С₅₇ВL₆;
эпидермоидная карцинома легкого Льюис, которую прививали мышам-самкам линии С₅₇ВL₆;
меланома В-16, которую прививали мышам-самкам линии С₅₇ВL₆.

Изучение профилактического противоопухолевого действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика проведено на линейных мышах, которым вводили олексин в течение 10 дней в разовых дозах 1 мг/кг и 10 мг/кг (курсовая 10 мг/кг и 100 мг/кг соответственно). Через сутки после окончания курса введения препарата мышам прививали аденокарциному молочной железы Са-755 в прививочной дозе 30 мг/мышь. О наличии профилактического противоопухолевого действия препарата судили по снижению прививаемости и задержке роста опухоли.

Исследования проводились c участием руководителя группы изучения природных веществ онкологического научного центра РАМН с.н.с., к.м.н. Е.М. Трещалиной и н.с. группы, к.м.н. Н.В.Андроновой (г.Москва).

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика по результатам скрининга отобран как потенциальное средство профилактики рака.

При пероральном применении концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в минимальной разовой дозе 1 мг/кг 10 кратным курсом (курсовая доза 10мг/кг) на Са –755 получено торможение роста опухоли (ТРО) — 81%. Однако в повторном опыте выраженность эффекта была меньше, ТРО составило 31%. При этом же курсе введения концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика в отношении этой же опухоли наблюдалось и увеличение продолжительности жизни животных (УПЖ) на 42%, которое также не воспроизводилось в повторном опыте. Во всех других случаях при применении препарата во всем диапазоне изученных доз и при двух путях введения не отмечено значимого ТРО и УПЖ.

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика проявил противоопухолевое профилактическое действие. В табл. 27 представлены данные по прививаемости опухоли Са-755 после 10-дневного курса введения продукта в двух дозировках. В прямой зависимости от величины примененной дозы концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика вызывает статистически значимую задержку роста опухоли на 59-73 % и продление жизни мышей на 31-35%, и приводит к снижению прививаемости опухоли: из 8 мышей в каждой группе 1-2 мыши оказались без опухоли.

Таблица 27

Изучение профилактического противоопухолевого действия концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика

Курсо-вая доза, мг/кг	Коли-чество живот-ных	Задержка роста опухоли, % от контроля	Увеличение продолжительности жизни, % от контроля	Количество мышей без опухоли
10	8	59 *	31	1**
100	8	73 *	35	2

Примечание. *-отличие с контролем достоверно (р<0,05);

**-в контрольной группе опухоли развивались у всех мышей.

Таким образом, концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика обладает ярко выраженным антиоксидантным действием и проявляет противоопухолевую активность в отношении аденокарциномы молочной железы Са-755 при применении ее в течение 10 дней до прививки опу

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Исследование иммунобиологической активности концентрированного водного очищенного экстракта из листьев персика показывает:

Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика обладает выраженной иммунодулирующей активностью. Он стимулирует накопление АОК в селезенке, повышает титр антител к эритроцитам барана, угнетает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа, повышает фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и макрофагов селезенки.
Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в экспериментальной модели иммунодефицита, вызванного циклофосфамидом, восстанавливает активность макрофагов селезенки, стимулирует накопление АОК, повышение титра антител и количество Т-лимфоцитов селезенки, препятствует снижению клеточности органов иммунной системы, увеличивает количество Т-лимфоцитов селезенки, т.е. способствует восстановлению гуморального и клеточного звеньев иммунной системы.
Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика в экспериментальной модели иммунодефицита, вызванного иммобилизационным стрессом, предупреждает изменения клеточности тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и фагоцитарной активности макрофагов селезенки, костного мозга и нейтрофилов периферической крови.
Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика обладает адаптогенными свойствами. Он повышает мышечную и силовую выносливость, двигательную и ориентировочную активность, а также порог болевой чувствительности.
Концентрированный водный очищенный экстракт из листьев персика обладает ярко выраженным антиоксидантным действием и проявляет противоопухолевую активность в отношении аденокарциномы молочной железы Са-755 при введении в течение 10 дней до прививки опухоли

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

Дмитрук С.Е., Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф. Биологически активные вещества лекарственных растений. — Новосибирск:Наука, Сиб. отд-ние, 1990.- 333 с.
Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. – Новосибирск: Наука, Сиб.отд-ние, 1978.- 256 с.
Кретович В.Л. Биохимия растений.- М.: Высш.шк., 1986.-503 с.
Барабой В.А. Действие некоторых растительных фенольных соединений на регуляторные системы организма млекопитающих //2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям: Тез. докл. — Алма-Ата, 1970. — С.120-121.
Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений.- Киев:Наук. думка, 1976.- 260 с.
Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. — М.: Наука, 1984.- 160 с.
Шамрай Е.Ф., Медовар Б.Л. О биологической активности полифенолов растений// Вопросы питания.-1967.-№4.-С.8-12.
Шинкаренко А.Л., Лисевицкая Л.И., Геращенко Г.И. Биологическое действие некоторых флавоноидов в эксперименте на животных // 2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям: Тез. докл. — Алма-Ата, 1970. — С.139-140.
Земцова Г.Н., Бандюкова В.А. Флавоноиды как лекарственные препараты // Фармация.-1982.-Т.31.-№3.-С.68-70.
Колхир В.К., Майнсков А.В., Сакович Г.С., Лескова Т.Е., Багинская А.И., Минеева М.Ф., Омельницкий П.П., Трумпе Т.Е., Вичканова С.А. Фармакологическое изучение нового антитромбического сбора «Касмин» // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы Второго Международного съезда. — СПб., 1998 .- С.55-56.
Robbins R.C. Specificites between blood cell adhesion in human diseases and antiadhesive action in vitro of methoxylated flavones // J.Clin.Pharm.- 1973.-Vol.13, № 10.-P.401-407.
Shimokoriama M. Flavones, chalcones and aurones//Chemistry of flavonoids compounds.- London-New-York: Perg.Pr., 1962.-P.286-316.
Батюк В.С., Васильченко Е.А., Васильева Л.Н., Чернобровая Н.В. Комиссаренко Н.Ф. Флавоноиды десмодиума и их обезболивающее действие // Химико-фармацевтический журнал.-1987.-№1.-С.63-67.
Безрук П.И., Любецкая Ж.А. Противовоспалительные свойства суммы флавоноидов из листьев скумпии подигрия // Фармакология и токсикология.-1969.-№5.-С.596-597.
Гоженко А.И., Славина Н.Г. Фенольные пигменты винограда – регуляторы адаптивных функций при нарушениях гомеостаза // Четвертая международная конференция по медицинской ботанике: Тез. докл. — Киев, 1997.- С.440-442.
Зинченко Т.В., Войтенко Г.Н., Липкан Г.И. Противовоспалительное, антитоксическое и гиперазотемическое действие препарата из чистеца прямого – стахирена //Фармакология и токсикология.- 1981.- Т.44.- №2.- С.191-194.
Рощин Ю.В., Геращенко Г.И. О противовоспалительной активности некоторых флавоноидов // Вопросы фармации Дальнего Востока. Вып.1. -Хабаровск, 1973. — С.134-135.
Malterud K.E. Сlarification of structure sedoflowrigenin – flavonoids from Sedum acre // Acta Pharm. Nord. -1991.-Vol.3, № 2.-P.99-100.
Pandley V.B., Dwivedi S.P.D., Rao J.V., Goel R.K. Flavonoids from Rhamnus procumbens and pharmacological effect cempferol-4-O-methyl ether // Fitoterapia.-1990.-Vol.61, №3.-P.243-244.
Ferrari F., Monache F.D., Juares B.E., Coussio J.D. Flavonoids of Margyricorspus pinnatus // Phytochemistry.- 1972.- Vol.11, №8.- P.2647.
Айзенман Б.Е., Дербенцева Н.А. Антимикробные препараты из зверобоя.- Киев:Наук. думка, 1976.-172 с.
Achenbach H. Alcaloids, flavonoids and phenylpropanoids from westafricans plant Oximitra velutina // Phytochemistry. -1991.-Vol.30, №4.-P.1265-1267.
Iudich A. Flavonoids Rubia davisiana Doganca S.// Fitoterapia.-1990.-Vol.61, № 6.-P.552-553.
Mossa J.S., Sattar Essam Abdel, Abou-Shoer M., Galal A.M. Free flavonoids from Rhus retinorrhoe Stend.ex.Olive// Int. J.Pharmacognosy.-1996.-Vol.34, №3.-P.198-201.
Ильченок Т.Ю., Хоменко А.И., Фригидова Л.М., Лепехин В.П., Верховский Ю.Г., Жербин Б.А., Шадурский К.С., Тюкавкина Н.А., Лаптева К.И., Кононова В.В. Фармакологические и радиозащитные свойства некоторых производных γ-пирона // Фармакология и токсикология.-1975.-Т.38.-№ 5.- С.607-612.
Вермичев С.М. Экспериментальное изучение токсичности и противоопухолевой активности синтетических и природных соединений группы пирона // 2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям: Тез. докл. — Алма-Ата, 1970. — С.125-126.
Вермичев С.М., Кабиев О.К. О противоопухолевой активности флавонолов// 2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям: Тез. докл. — Алма-Ата, 1970. — С.127-128.
Ажунова Т.Н., Самбуева З.Г., Николаев С.М., Матханов Э.И., Нагаслаева Л.А. Желчегонное действие экстракта толокнянки обыкновенной //Фармация.-1988.-Т.37.-№2.-С.41-43.
Николаев С.М. Желчегонное действие экстракта горечавки бородатой // Фармация.-1985.-Т.34.-№3.-С.16-19.
Хаджай Я.И., Кузнецова В.Ф. О действии экстракта артишока на печень // Фармакол. и токсикол.-1971.-№6.-С.685-685.
Степанова Э.Ф., Василенко Ю.К., Фролова Л.М., Юна Бекеле, Окомлова М.С. Использование высушенных извлечений из травы пастушьей сумки в качестве гепатозащитных средств//Фармация.-1993.-Т.42.- №2.-С9-10.
Емельянов О.Ф., Макаров В.А. О диуретических свойствах флавоноидов терновника // 2-й Всерос.съезд фармацевтов:Тез.докл.-М., 1969.-С.106-106.
Халматов Х.Х. Диуретическое действие флавоноидов, выделенных из некоторых растений Казахстана // 2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям: Тез. докл. — Алма-Ата, 1970. — С.139-139.
Бабаскин В.С., Киселевский М.В. Влияние суммы флавоноидов, выделенных из клевера лугового, на моторику тонкой кишки // Фармация.-1992.- Т.41.-№ 6.- С.78-79.
Фенольные соединения и их физиологические функции: Материалы 1-го Всесоюз.симпоз. по фенольным соединениням. – М., 1968.- 421 с.
Соколова В.Е., Васильченко Е.А., Измайлова И.К. Об анаболизирующем действии флавоноидов // Фармакология и токсикология.— 1978.- Т.41.- №3.- С.323-326.
Ашаева Л.А., Алханова Н.А., Ладыгина Е.Я., Артемова Н.П., Куршакова Л.Н., Анчикова Л.И. Сахароснижающие свойства настоя цветков липы //Фармация.-1985.-Т. 34.-№3.-С.57-60.
Бахтина С.М., Лесиовская Е.Е., Саканян Е.И., Коноплева Е.В. Психотропное действие полиэкстракта из травы остролодочника остролистного // Четвертая международная конференция по медицинской ботанике: Тез. докл. — Киев, 1997.- С.429-430.
Formica J.V., Regelson W. Rewiew of the biology of quercetin and related bioflavonoids //Fооd.Chem.Toxicol.-1995.-Vol.33, №12.-P.1061-1080.
Hertog M.G.L. Flavonols in wine and tea and prevention of coronary heart disease// Polyphenols 96. Ed.INRA.- Paris, 1998.-P.117-131.
Konnen M., Caen J. Red wine derived compounds and their putative antiaterogenic properties // Polyphenols 96.Ed.INRA.- Paris, 1998.-P.105-115.
Renaud S., De Logreril M. Wine, alchocol, platelets and the French paradox for coronary heart disease // Lancet.-1992.-Vol.339.- P.1523-1526.
Remesy C., Manach C., Demigne C. Interest of polyphenols in preventive nutrition// Polyphenols 96. Ed. INRA.- Paris, 1998.- P.251-256.
Кабиев О.К., Вермичев С.М. О противоопухолевой активности лейкоантоцианидинов и катехинов // Вопросы онкологии.-1966.-Т.12.-№4.-С.61-64.
Кабиев О.К., Балмуханов С.Б. Природные фенолы – перспективный класс противоопухолевых и радиопотенциирующих соединений.- М.: Медицина, 1975.- 189 с.
Семенов А.А. Природные противоопухолевые соединения (структура и механизм действия). — Новосибирск, 1979.- 222 с.
Hertog M.G.L., Hollman P.C.H., Venema D.P. Optimization of a quantitative HPLC determination of potentially anticarcinogenic flavonoids in vegetables and fruit // J. Agric.Food.Chem.- 1992.- Vol.40.- P.1591-1598.
Suschetet M., Siess M.-H., Le Bon A.-M. Anticarcinogenic properties of some flavonoids// Polyphenols 96. Ed. INRA. – Paris, 1998.- P.165-204.
Борисова А.М., Лактионова Л.В., Сетдикова Н.Х. Опыт клинического применения полиоксидония при вторичных иммунодефицитах взрослых // Intern.J.Immunorehab. – 1998. -№ 10. – С.100-109.
Дубинская В.А., Минеева М.Ф., Колхир В.К. Влияние природных веществ растительного происхождения на активность ферментов антиоксидантной защиты // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.- С.49-50.
Каракулова Е.В., Ситожевский А.В., Иванов В.В., Луста И.В., Хавалкин И.В. Влияние экстракта тысячелистника азиатского на перекисное окисление липидов и глутатионзависимую систему антиперекисной защиты в сравнении с ионолом // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.- С.50-51.
Максимова Т.М., Лекарственные средства природного происхождения, обладающие антиоксидантной активностью // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.-С.41-42.
Мартыненко Л.Д., Шепелев А.П., Алемукина Л.В. Влияние модуляторов свободно радикального окисления на активность фагоцитов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1990.-№10.-С.113-117.
Шлянкевич М.А., Сергеев А.В., Голубева З.Ф. Роль фитосоединений в профилактике онкозаболеваний // Вопросы питания. — 1993.-№4.-С.26-32.
Hanasaki J., Ogawa S., Fucui S. The correlation between active oxygens scavenging and antioxidative effects of flavonoid // Free Rad.Biol.Med.-1994.-Vol.16.-P.845-850.
Rice-Evans C.A., Miller N.J., Paganga G. Structure-antioxidant activity relationships of flavonoids and phenolic acids// Free Rad.Biol.Med.-1996.-Vol.20, № 7.-P.749-760.
Бахтина С.М., Соловьева У.Г. К вопросу об антиоксидантной активности препарата «Оксофил» // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.- С.43-44.
Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. / Бурлакова Е.Б., Алексеннко А.В., Молочикна Е.М. и др./: АН СССР, Ин-т. хим.физики.-М.: Наука.-1975.-214 с.
Бульбук Г.А. Стимуляция резистентности организма при опухолевых заболеваниях.- Кишинев: «Штиинца», 1977.-143 с.
Гоненко В.А. Антиоксидантная активность спиртовых настоев из некоторых лекарственных растений // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.- С.50-50.
Евдокимова А.И., Пулатова Т.П., Максумов М.Н., Баргман Л.И., Шаныгина Л.Н. Некоторые химические и физиологические аспекты изучения флавоноидов пустырника туркестанского // Изучение лекарственных растений: Сб. науч. тр.- Ташкент: Изд-во Ташкентского Государственного медицинского института, 1984.- С.54-55.
Ковалева Н.Г. Лечение растениями. Очерки по фитотерапии. — М.:Советский спорт, 1993.-320 с.
Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. Фитотерапия антиоксидантами биофлавоноидами // V Российский Нац. конгресс «Человек и лекарство».- М., 1998- С.374-374.
Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. Диквертин – новое антиоксидантное и капилляропротекторное средство // Химико-фармацевтический журнал.-1995.-№ 9.-С.61-64.
Корман Д.Б. Некоторые лекарственные свойства антиоксидантов // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. — М.:Наука, 1982.- С.213—223.
Новоселова Е.Г., Макар В.Р., Семилетова Н.В., Галибина И.В., Вакулова Л.А., Фесенко Е.Е. Участие антиоксидантов в регуляции клеточного иммунитета // Иммунология.- 1998.-№ 4.- С.33-36.
Запрометов М.Н. Биосинтез фенольных соединений // 2-й Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям:Тез. докл.- Алма-Ата, 1970.-С.4-5.
Рыжикова М.А., Фархутдинов Р.Р., Загидуллин Ш.З., Сибиряк С.В. Сравнительная оценка антиокислительной активности некоторых лекарственных растений in vitro и in vivo // Биоантиоксидант: Материалы международного симпозиума. – Тюмень, 1997.- С.47-49.
Селиванова И.А., Тюкавкина Н. А., Колесник Ю.А. Биофлавоноиды как микронутриенты, лекарственные средства и биологически активные добавки к пище //Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы Второго Международного съезда. — СПб., 1998.- С.26-34.
Селье Г. Концепция стресса как мы ее представляем в 1976 году // Новое о гормонах и механизмах их действия. — Киев: Наук. думка, 1977. — С. 27-51.
Смирнов Л.Д., Сускова В.С. Модуляция иммунного ответа антиоксидантами // Химико-фармацевтический журнал.- 1989.- №7-С.773-784.
Соколовский В.В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов внешней среды // Антиоксиданты и адаптация / Под ред. проф. Соколовского В.В. — Л.: ЛСГМИ, 1984.- С.5-19.
Машковский М.Я. Лекарственные средства. — В двух частях.Ч.1.-12-е изд., перераб. и доп.- М: Медицина, 1993.- 736 с.
Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии // Тр.лаборатории новых антибиотиков ин-та им В.Л.Комарова / Под ред. проф.П.К.Булатова. — Л.: Медгиз, Ленин.отд-ние, 1959.-334 с.
Вогралик В.Г., Вязьменский Э.С. Очерки китайской медицины.- М.:Медгиз, 1961.- 192 с.
Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.И., Яшенко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения: (Растения целители). – М.: Высш.шк.,1983.-544 с.
Ибрагимов Ф.И., Ибрагимова В.С. Основные лекарственные средства китайской медицины /Под ред. А.Ф.Гаммерман.- М.: Медгиз, 1960.- 412 с.
Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. – Саратов: Приволжское книж. изд-во, 1991. – 530 с.
Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. — М.:Медицина, 1974.- 143 с.
Козлов В.А. Клиническая иммунология в клинике внутренних болезней. — Новосибирск: типография СО РАМН, 1997.-21 с.
Большакова И.В., Лозовская Е.Л.. Сапежинский И.И. Антиоксидантные свойства ряда экстрактов лекарственных растений // Биофизика.-1997.-Т.42, вып.2.-С.480-483.
Лозовская Е.Л., Сапежинский И.М. Сравнительная эффективность некоторых лекарственных препаратов как акцепторов супероксидных радикалов // Биофизика.-1993.-Т.38, вып.1.-С.31-36.

Содержание

опытный

продукт

Группа животных

Доза,

мл/кг

Контроль

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Контроль

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Контроль

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Группа животных

Доза,

мл/кг

Контроль

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Группа животных

Доза,

мл/кг

Контроль

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

опытный

продукт

Группа живот-ных

Доза,

мл/кг

Контроль 1

Контроль 2(ЦФ)

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Контроль 1

Контроль 2(ЦФ)

опытный

продукт

0,02

0,01

0,005

0,0025

0,00125

Группа животных

Доза,

мл/кг

Контроль 1

Контроль 2(ЦФ)

Количество форменных элементов крови, х 10⁹/л